Indicação
de uso
O meio Rappaport Vassiliadis
Salmonella Enrichment Broth, também conhecido como Caldo Enriquecimento Salmonella Rappaport Vassiliadis, é um meio de
enriquecimento usado para selecionar Salmonella
em amostras de alimentos e amostras ambientais. Atende a Farmacopeia Brasileira (FB), Farmacopeia Americana (USP), Farmacopeia Europeia (EP) e Farmacopeia Japonesa (JP) para
o ensaio de pesquisa de Salmonella em
produtos não estéreis.
Rappaport,
Konforti e Navon formularam um meio de enriquecimento para Salmonella que incluía quantidades muito elevadas de verde malaquita
e cloreto de magnésio como inibidores. O meio Rappaport original foi
desenvolvido para o enriquecimento de S.
paratyphi e outros sorotipos conhecidos por serem relativamente resistentes
ao verde brilhante. Além disso, o cloreto de magnésio foi acrescentado para neutralizar
o efeito tóxico do corante para Salmonella.
Vassiliadis, Paternaki, Papaiconomon, Papadakis e Trichopoulos modificaram a
formulação reduzindo a concentração de verde malaquita para um terço. Van
Schothorst e Renaud relataram que o uso de peptona de soja em vez de peptona
animal, melhorou as taxas de recuperação de Salmonella.
Resultados semelhantes foram obtidos em vários outros estudos.
Este
meio de enriquecimento apresenta seletividade para análise de pesquisa de salmonelas porque estas
bactérias, incluindo outras espécies intestinais, são tipicamente inibidas pela
presença de verde malaquita, por alta pressão osmótica e / ou pH baixo. S. typhi e S. paratyphi A são
sensíveis ao verde malaquita e podem ter seu crescimento inibido.
Formulação
e Preparo
Fórmula
Aproximada Por Litro
- Peptona de soja - 4,5 g
- Cloreto de magnésio hexaidratado - 29,0 g
- Cloreto de sódio - 8,0 g
- Fosfato de potássio dibásico - 0,4 g
- Fosfato de potássio monobásico - 0,6 g
- Verde malaquita - 36,0 mg
O pH final é 5.2 ± 0.2
A peptona
de soja é uma fonte de carbono e nitrogênio fornecendo requisitos gerais de
crescimento. Cloreto de magnésio eleva a pressão osmótica no meio. Cloreto de
sódio mantém o equilíbrio osmótico. Fosfato de potássio dibásico e Fosfato de
potássio monobásico são agentes tamponantes. Verde Malaquita é inibidor de
organismos que não sejam Salmonelas.
O pH baixo do meio, combinado com a presença de verde malaquita e cloreto de
magnésio, ajudam a alta seletividade para Salmonella
spp.
O preparo do meio deve seguir
as instruções do fabricante. Este meio deve ser autoclavado em temperatura que não
exceda a 115°C, portanto é importante ter um ciclo validado nesta temperatura
para a esterilização exclusiva do caldo Rappaport.
Micro-organismos
Indicados para o Teste de Grow Promotion
Para verificar a esterilidade
dos meios de cultura, colocá-los em incubação por, no mínimo, 72 horas, na
temperatura adequada. Não deve haver turvação ou alteração de cor.
Os microrganismos citados pela
United States Pharmacopeia e Farmacopeia Brasileira para o teste de Grow
Promotion em Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth são:
Para
promoção de crescimento (verificar a seletividade):
Salmonella
enterica ssp
sorotipo typhimurium ATCC 14028 ou S. enterica ssp sorotipo abony NBRC 100797, NCTC 6017, ou CIP 80.39
Para
verificar a capacidade inibitória:
Staphylococcus
aureus ATCC
6538.
Inocule
no meio pequeno número (não mais de 100 UFC) do micro-organismo teste. Incubar
na temperatura e tempo especificados no ensaio de pesquisa Salmonella. Quando há
resultado positivo, o meio torna-se turvo. No caso de resultado negativo, o
meio permanece límpido, mantendo a coloração azul característica.
Fontes:
Difco
& BBL Manual - Manual of Microbiological Culture Media – Second Edition
United
States Pharmacopeia 40ª ed. 2017
Farmacopeia
Brasileia 5ª ed. 2010
