Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth

Indicação de uso

O meio Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth, também conhecido como Caldo Enriquecimento Salmonella Rappaport Vassiliadis, é um meio de enriquecimento usado para selecionar Salmonella em amostras de alimentos e amostras ambientais. Atende a Farmacopeia Brasileira (FB), Farmacopeia Americana (USP), Farmacopeia Europeia (EP) e Farmacopeia Japonesa (JP) para o ensaio de pesquisa de Salmonella em produtos não estéreis.

Rappaport, Konforti e Navon formularam um meio de enriquecimento para Salmonella que incluía quantidades muito elevadas de verde malaquita e cloreto de magnésio como inibidores. O meio Rappaport original foi desenvolvido para o enriquecimento de S. paratyphi e outros sorotipos conhecidos por serem relativamente resistentes ao verde brilhante. Além disso, o cloreto de magnésio foi acrescentado para neutralizar o efeito tóxico do corante para Salmonella. Vassiliadis, Paternaki, Papaiconomon, Papadakis e Trichopoulos modificaram a formulação reduzindo a concentração de verde malaquita para um terço. Van Schothorst e Renaud relataram que o uso de peptona de soja em vez de peptona animal, melhorou as taxas de recuperação de Salmonella. Resultados semelhantes foram obtidos em vários outros estudos.

Este meio de enriquecimento apresenta seletividade para análise de pesquisa de salmonelas porque estas bactérias, incluindo outras espécies intestinais, são tipicamente inibidas pela presença de verde malaquita, por alta pressão osmótica e / ou pH baixo. S. typhi e S. paratyphi A são sensíveis ao verde malaquita e podem ter seu crescimento inibido.

Formulação e Preparo

Fórmula Aproximada Por Litro 

• Peptona de soja - 4,5 g
• Cloreto de magnésio hexaidratado - 29,0 g
• Cloreto de sódio - 8,0 g
• Fosfato de potássio dibásico - 0,4 g
• Fosfato de potássio monobásico - 0,6 g
• Verde malaquita - 36,0 mg 

O pH final é 5.2 ± 0.2

A peptona de soja é uma fonte de carbono e nitrogênio fornecendo requisitos gerais de crescimento. Cloreto de magnésio eleva a pressão osmótica no meio. Cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico. Fosfato de potássio dibásico e Fosfato de potássio monobásico são agentes tamponantes. Verde Malaquita é inibidor de organismos que não sejam Salmonelas. O pH baixo do meio, combinado com a presença de verde malaquita e cloreto de magnésio, ajudam a alta seletividade para Salmonella spp.

O preparo do meio deve seguir as instruções do fabricante. Este meio deve ser autoclavado em temperatura que não exceda a 115°C, portanto é importante ter um ciclo validado nesta temperatura para a esterilização exclusiva do caldo Rappaport.

Micro-organismos Indicados para o Teste de Grow Promotion

Para verificar a esterilidade dos meios de cultura, colocá-los em incubação por, no mínimo, 72 horas, na temperatura adequada. Não deve haver turvação ou alteração de cor.

Os microrganismos citados pela United States Pharmacopeia e Farmacopeia Brasileira para o teste de Grow Promotion em Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth são:

Para promoção de crescimento (verificar a seletividade):

Salmonella enterica ssp sorotipo typhimurium ATCC 14028 ou S. enterica ssp sorotipo abony NBRC 100797, NCTC 6017, ou CIP 80.39

Para verificar a capacidade inibitória:

Staphylococcus aureus ATCC 6538.

Inocule no meio pequeno número (não mais de 100 UFC) do micro-organismo teste. Incubar na temperatura e tempo especificados no ensaio de pesquisa Salmonella. Quando há resultado positivo, o meio torna-se turvo. No caso de resultado negativo, o meio permanece límpido, mantendo a coloração azul característica.

Fontes:

Difco & BBL Manual - Manual of Microbiological Culture Media – Second Edition

United States Pharmacopeia 40ª ed. 2017

Farmacopeia Brasileia 5ª ed. 2010