Indicação
de uso
O meio Mannitol Salt Agar,
também conhecido como Agar Sal Manitol,
é utilizado para o isolamento seletivo de Staphylococcus e para a detecção de Staphylococcus aureus provenientes de
amostras clínicas. Mannitol Salt Agar é listado como um dos vários meios
recomendados para a enumeração de bactérias gram-positivas em cosméticos, amostras
clínicas, e produtos farmacêuticos. Também usado na indústria alimentícia para
o isolamento e identificação de Staphylococcus
em líquidos e produtos lácteos, carnes e derivados, incluindo conservas e
pescados. É usado no controle de qualidade microbiológico de produtos
farmacêuticos não estéreis para Staphylococcus
aureus atendendo a Farmacopeia Brasileira (FB), Farmacopeia dos Estados
Unidos (USP), Farmacopeia Europeia (EP) e Farmacopeia Japonesa (JP).
Koch,
em 1942, relatou que apenas os Staphylococcus
crescem em meio ágar contendo 7,5% de cloreto de sódio. Chapman estudou este
fenômeno em maior detalhe e concluiu que a adição de 7,5% de cloreto de sódio
ao Manitol Vermelho de Fenol Ágar resulta em um meio melhorado para o isolamento
de Staphylococcus de coagulação
plasmática.
Formulação
e Preparo
Fórmula Aproximada
Por Litro
- Hidrolisado de pancreático de caseína - 5,0 g
- Peptona péptica de tecido animal - 5,0 g
- Extrato de carne - 1,0 g
- D-manitol - 10,0 g
- Cloreto de sódio - 75,0 g
- Ágar - 15,0 g
- Vermelho fenol - 25,0 mg
O pH final é 7.4 ± 0.2
O
Mannitol Salt Agar contém hidrolisado de pancreático de caseína e peptonas que
fornecem nutrientes essenciais para o crescimento como o nitrogênio, carbono e
enxofre. O cloreto de sódio a uma concentração de 7,5% resulta numa inibição
parcial ou completa de outros organismos bacterianos que não são Staphylococcus. A fermentação do manitol,
conforme indicada por uma alteração no indicador vermelho de fenol, ajuda na diferenciação
das espécies de Staphylococcus devido
à produção de ácido. Os Staphylococcus
com resultados positivos para a coagulase (por exemplo, Staphylococcus aureus) produzem colônias amarelas e um meio amarelo
circundante ao passo que os Staphylococcus
com resultados negativos para a coagulase produzem colônias vermelhas e nenhuma
alteração na cor do indicador vermelho de fenol. Agar é um agente solidificante.
O preparo do meio deve seguir
as instruções do fabricante. Esterilizar em autoclave usando um ciclo validado.
Micro-organismos
Indicados para o Teste de Grow Promotion
Para verificar a esterilidade
dos meios de cultura, colocá-los em incubação por, no mínimo, 72 horas, na
temperatura adequada. Não deve haver crescimento microbiano ou alteração de cor.
Os microrganismos citados pela
United States Pharmacopeia e Farmacopeia Brasileira para o teste de Grow
Promotion em Mannitol
Salt Agar são:
Para
promoção de crescimento (verificar a seletividade):
Staphylococcus
aureus
ATCC 6538, NCIMB 9518, CIP 4.83, ou NBRC 13276
Para
verificar capacidade inibitória:
Escherichia
coli ATCC
8739, NCIMB 8545, CIP 53.126, ou NBRC 3972
Outros
micro-organismos podem ser inoculados, de acordo com a metodologia usada.
Inocule
no meio pequeno número (não mais de 100 UFC) do micro-organismo teste. Incubar
na temperatura e tempo especificados no ensaio de pesquisa Staphylococcus aureus.
Após
o período de incubação recomendado, as placas devem mostram colônias isoladas
em áreas com estrias e crescimento confluente em áreas de inoculação mais
concentradas. Staphylococcus
coagulase-positivos produz crescimento de colônias amarelas com zonas amarelas.
Staphylococcus coagulase negativos
produzem pequenas colônias vermelhas sem mudança de cor no meio. As
maiorias das outras bactérias terão seu crescimento inibido.
Várias
espécies de Staphylococcus além da S. aureus têm resultados positivos para
o manitol e produzem colônias amarelas circundadas por zonas amarelas neste
meio (por exemplo, S. capitis, S. xylosus, S. cohnii, S. sciuri, S. simulans e outras espécies). Por este
motivo, é necessário realizar outros testes bioquímicos para a identificação de
S. aureus ou de outras espécies.
Consultar a bibliografia apropriada.
Fontes:
Difco
& BBL Manual - Manual of Microbiological Culture Media – Second Edition
United
States Pharmacopeia 40ª ed. 2017
Farmacopeia
Brasileia 6ª ed. 2019
