Mannitol Salt Agar

Indicação de uso

O meio Mannitol Salt Agar, também conhecido como Agar Sal Manitol, é utilizado para o isolamento seletivo de Staphylococcus e para a detecção de Staphylococcus aureus provenientes de amostras clínicas. Mannitol Salt Agar é listado como um dos vários meios recomendados para a enumeração de bactérias gram-positivas em cosméticos, amostras clínicas, e produtos farmacêuticos. Também usado na indústria alimentícia para o isolamento e identificação de Staphylococcus em líquidos e produtos lácteos, carnes e derivados, incluindo conservas e pescados. É usado no controle de qualidade microbiológico de produtos farmacêuticos não estéreis para Staphylococcus aureus atendendo a Farmacopeia Brasileira (FB), Farmacopeia dos Estados Unidos (USP), Farmacopeia Europeia (EP) e Farmacopeia Japonesa (JP).

Koch, em 1942, relatou que apenas os Staphylococcus crescem em meio ágar contendo 7,5% de cloreto de sódio. Chapman estudou este fenômeno em maior detalhe e concluiu que a adição de 7,5% de cloreto de sódio ao Manitol Vermelho de Fenol Ágar resulta em um meio melhorado para o isolamento de Staphylococcus de coagulação plasmática.

Formulação e Preparo

Fórmula Aproximada Por Litro

• Hidrolisado de pancreático de caseína - 5,0 g
• Peptona péptica de tecido animal - 5,0 g
• Extrato de carne - 1,0 g
• D-manitol - 10,0 g
• Cloreto de sódio - 75,0 g
• Ágar - 15,0 g
• Vermelho fenol - 25,0 mg

O pH final é 7.4 ± 0.2

O Mannitol Salt Agar contém hidrolisado de pancreático de caseína e peptonas que fornecem nutrientes essenciais para o crescimento como o nitrogênio, carbono e enxofre. O cloreto de sódio a uma concentração de 7,5% resulta numa inibição parcial ou completa de outros organismos bacterianos que não são Staphylococcus. A fermentação do manitol, conforme indicada por uma alteração no indicador vermelho de fenol, ajuda na diferenciação das espécies de Staphylococcus devido à produção de ácido. Os Staphylococcus com resultados positivos para a coagulase (por exemplo, Staphylococcus aureus) produzem colônias amarelas e um meio amarelo circundante ao passo que os Staphylococcus com resultados negativos para a coagulase produzem colônias vermelhas e nenhuma alteração na cor do indicador vermelho de fenol. Agar é um agente solidificante.

O preparo do meio deve seguir as instruções do fabricante. Esterilizar em autoclave usando um ciclo validado.

Micro-organismos Indicados para o Teste de Grow Promotion

Para verificar a esterilidade dos meios de cultura, colocá-los em incubação por, no mínimo, 72 horas, na temperatura adequada. Não deve haver crescimento microbiano ou alteração de cor.

Os microrganismos citados pela United States Pharmacopeia e Farmacopeia Brasileira para o teste de Grow Promotion em Mannitol Salt Agar são:

Para promoção de crescimento (verificar a seletividade):

Staphylococcus aureus ATCC 6538, NCIMB 9518, CIP 4.83, ou NBRC 13276

Para verificar capacidade inibitória:

Escherichia coli ATCC 8739, NCIMB 8545, CIP 53.126, ou NBRC 3972

Outros micro-organismos podem ser inoculados, de acordo com a metodologia usada.  

Inocule no meio pequeno número (não mais de 100 UFC) do micro-organismo teste. Incubar na temperatura e tempo especificados no ensaio de pesquisa Staphylococcus aureus.

Após o período de incubação recomendado, as placas devem mostram colônias isoladas em áreas com estrias e crescimento confluente em áreas de inoculação mais concentradas. Staphylococcus coagulase-positivos produz crescimento de colônias amarelas com zonas amarelas. Staphylococcus coagulase negativos produzem pequenas colônias vermelhas sem mudança de cor no meio. As maiorias das outras bactérias terão seu crescimento inibido.

Várias espécies de Staphylococcus além da S. aureus têm resultados positivos para o manitol e produzem colônias amarelas circundadas por zonas amarelas neste meio (por exemplo, S. capitis, S. xylosus, S. cohnii, S. sciuri, S. simulans e outras espécies). Por este motivo, é necessário realizar outros testes bioquímicos para a identificação de S. aureus ou de outras espécies. Consultar a bibliografia apropriada.

Fontes:

Difco & BBL Manual - Manual of Microbiological Culture Media – Second Edition

United States Pharmacopeia 40ª ed. 2017

Farmacopeia Brasileia 6ª ed. 2019