Indicação
de uso
O meio Columbia Agar Base,
também conhecido como Columbia Agar ou Agar
Columbia, com ou sem a
adição de 5% (ou 10%) de sangue de ovelha, é um meio altamente nutritivo de uso
geral utilizado para o isolamento e cultura de micro-organismos não exigentes e
exigentes provenientes de amostras clínicas, e pesquisa de Clostridium em amostras de cosméticos, produtos descartáveis e
produtos farmacêuticos. Está em conformidade com a Farmacopeia Brasileira (FB), Farmacopeia
dos Estados Unidos (USP), Farmacopeia Europeia (EP) e Farmacopeia Japonesa (JP).
Ellner
et al., em 1966, relataram o desenvolvimento de um formulação de agar, que foi
designada como Columbia Agar. A base alcança o crescimento mais rápido e
exuberante obtido
a partir de hidrolisado de caseína com melhor definição de reações hemolíticas,
morfologia colonial mais típica e melhor produção de pigmento alcançada com
meios contendo infusão de peptona.
O
Columbia Agar Base é utilizado como base para meios contendo sangue e para
formulações seletivas de meios em que várias combinações de agentes
antimicrobianos são usadas como aditivos.
O
Columbia Agar está listado como o único meio recomendado para o isolamento de Clostridium sp em produtos farmacêuticos
não estéreis.
Formulação
e Preparo
Fórmula
Aproximada Por Litro
- Hidrolisado de pancreático de caseína - 10,0 g
- Peptona de carne digestão - 5,0 g
- Digesto pancreático de coração - 3,0 g
- Extrato de levedura - 5,0 g
- Amido de milho - 1,0 g
- Cloreto de sódio - 5,0 g
- Ágar, de acordo com o poder gelificante - 10,0 - 15,0 g
O pH final é 7.3 ± 0.2
As
propriedades para suportar um crescimento superior do ágar Columbia derivam da
combinação de duas peptonas com extrato de levedura como uma fonte de vitaminas
de complexo B. O amido fornece uma fonte de carbono e o cloreto de sódio mantém
o equilíbrio osmótico. O amido de milho também tem a função de absorver os
subprodutos tóxicos contidos nas amostras e funciona como uma fonte de
energia para os organismos que possuem alfa-amilases. O Agar é o agente
solidificante.
O preparo do meio deve seguir
as instruções do fabricante. Esterilizar em autoclave usando ciclo validado.
Esfriar para 45 °C a 50 °C e adicionar, se necessário, sulfato de gentamicina
correspondente a 20 mg de gentamicina base, verter em placas de Petri.
Micro-organismos
Indicados para o Teste de Grow Promotion
Para verificar a esterilidade
dos meios de cultura, colocá-los em incubação por, no mínimo, 72 horas, na
temperatura adequada. Não deve haver crescimento microbiano ou alteração de cor.
Os micro-organismos citados
pela United States Pharmacopeia e Farmacopeia Brasileira para o teste de Grow
Promotion em Columbia Agar são:
Para
promoção de crescimento (verificar a seletividade):
Clostridium
sporogenes ATCC
11437 (NBRC 14293, NCIMB 12343, CIP 100651) ou ATCC 19404 (NCTC 532 ou CIP
79.3).
Outros
micro-organismos podem ser inoculados, de acordo com a metodologia usada.
Inocule
no meio pequeno número (não mais de 100 UFC) do micro-organismo teste. Incubar
na temperatura, condições e tempo especificados no ensaio de pesquisa Clostridium.
O
crescimento de colônias catalase negativas, com micromorfologia de bacilo Gram positivo
(com ou sem endósporos) indica presença provável de Clostridium.
Fontes:
Difco
& BBL Manual - Manual of Microbiological Culture Media – Second Edition
United
States Pharmacopeia 40ª ed. 2017
Farmacopeia
Brasileia 6ª ed. 2019
