Columbia Agar Base

Indicação de uso

O meio Columbia Agar Base, também conhecido como Columbia Agar ou Agar Columbia, com ou sem a adição de 5% (ou 10%) de sangue de ovelha, é um meio altamente nutritivo de uso geral utilizado para o isolamento e cultura de micro-organismos não exigentes e exigentes provenientes de amostras clínicas, e pesquisa de Clostridium em amostras de cosméticos, produtos descartáveis e produtos farmacêuticos. Está em conformidade com a Farmacopeia Brasileira (FB), Farmacopeia dos Estados Unidos (USP), Farmacopeia Europeia (EP) e Farmacopeia Japonesa (JP).

Ellner et al., em 1966, relataram o desenvolvimento de um formulação de agar, que foi designada como Columbia Agar. A base alcança o crescimento mais rápido e exuberante obtido a partir de hidrolisado de caseína com melhor definição de reações hemolíticas, morfologia colonial mais típica e melhor produção de pigmento alcançada com meios contendo infusão de peptona.

O Columbia Agar Base é utilizado como base para meios contendo sangue e para formulações seletivas de meios em que várias combinações de agentes antimicrobianos são usadas como aditivos.

O Columbia Agar está listado como o único meio recomendado para o isolamento de Clostridium sp em produtos farmacêuticos não estéreis.

Formulação e Preparo

Fórmula Aproximada Por Litro 

• Hidrolisado de pancreático de caseína - 10,0 g
• Peptona de carne digestão - 5,0 g
• Digesto pancreático de coração - 3,0 g
• Extrato de levedura - 5,0 g
• Amido de milho - 1,0 g
• Cloreto de sódio - 5,0 g
• Ágar, de acordo com o poder gelificante - 10,0 - 15,0 g 

O pH final é 7.3 ± 0.2

As propriedades para suportar um crescimento superior do ágar Columbia derivam da combinação de duas peptonas com extrato de levedura como uma fonte de vitaminas de complexo B. O amido fornece uma fonte de carbono e o cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico. O amido de milho também tem a função de absorver os subprodutos tóxicos contidos nas amostras e funciona como uma fonte de energia para os organismos que possuem alfa-amilases. O Agar é o agente solidificante.

O preparo do meio deve seguir as instruções do fabricante. Esterilizar em autoclave usando ciclo validado. Esfriar para 45 °C a 50 °C e adicionar, se necessário, sulfato de gentamicina correspondente a 20 mg de gentamicina base, verter em placas de Petri.

Micro-organismos Indicados para o Teste de Grow Promotion

Para verificar a esterilidade dos meios de cultura, colocá-los em incubação por, no mínimo, 72 horas, na temperatura adequada. Não deve haver crescimento microbiano ou alteração de cor.

Os micro-organismos citados pela United States Pharmacopeia e Farmacopeia Brasileira para o teste de Grow Promotion em Columbia Agar são:

Para promoção de crescimento (verificar a seletividade):

Clostridium sporogenes ATCC 11437 (NBRC 14293, NCIMB 12343, CIP 100651) ou ATCC 19404 (NCTC 532 ou CIP 79.3).

Outros micro-organismos podem ser inoculados, de acordo com a metodologia usada.  

Inocule no meio pequeno número (não mais de 100 UFC) do micro-organismo teste. Incubar na temperatura, condições e tempo especificados no ensaio de pesquisa Clostridium.

O crescimento de colônias catalase negativas, com micromorfologia de bacilo Gram positivo (com ou sem endósporos) indica presença provável de Clostridium.

Fontes:

Difco & BBL Manual - Manual of Microbiological Culture Media – Second Edition

United States Pharmacopeia 40ª ed. 2017

Farmacopeia Brasileia 6ª ed. 2019