Indicação
de uso
O meio M-PA-C Agar, é usado para o isolamento seletivo da Pseudomonas aeruginosa em amostras de
água pela técnica de filtração em membrana. É o meio de escolha da Farmacopeia
Brasileira 6ª edição e pelo Standard Methods For the Examination of Water and
Wastewater, este último sendo o compêndio que a Farmacopeia Americana recomenda
em seu capítulo 〈1231〉 WATER FOR PHARMACEUTICAL PURPOSES para análises
microbiológicas em água.
Muitos
dos meios utilizados para a recuperação da Pseudomonas
aeruginosa pela técnica de membrana filtrante não tinha especificidade e
era de valor limitado quando a microbiota heterogênea estava presente na
amostra de água. Então Levin e Cabelli desenvolveram o M-PA Agar como um meio
para filtração por membrana, seletivo para P.
aeruginosa. Essa formulação incorporou antimicrobianos, canamicina, ácido nalidíxico,
sulfapiridina e cicloheximida, que tornam o meio moderadamente seletivo.
Novamente a formulação original foi modificada, elevando o pH e alterando a
formulação e concentração de alguns componentes. O meio resultante foi
designado M-PA-B Ágar. Brodsky e Ciebin modificaram esse meio, eliminando sulfapiridina
e cicloheximida e produziram então o Agar M-PAC. Essa formulação resultou na capacidade
de enumerar P. aeruginosa após apenas
24 horas de incubação a 41,5 °C em comparação às 72 horas necessárias com o
ágar M-PA-B e 96 horas para um teste MPN presuntivo. O ágar M-PA-C é
identificado como Modificado Agar M-PA Standard Methods For the Examination of
Water and Wastewater
Pseudomonas podem ser encontradas na água (doce, salobra ou do mar), no solo, na
poeira em suspensão, no ar e nos vegetais. Várias espécies de Pseudomonas têm sido isoladas em água
mineral, incluindo P. mandelii, P. migulae, P. rhodesiae e P. veronii,
mas a principal preocupação é a presença de P.
aeruginosa, por ser a mais comum como patógeno oportunista para humanos.
Para
a contagem de P. aeruginosa,
utiliza-se a técnica de membrana filtrante (UFC/100mL). O método da filtração
por membrana tem as vantagens de ser mais simples de executar, não exigindo a
confirmação e permitindo uma contagem direta de P. aeruginosa. O procedimento de filtração em membrana é limitado à
análise de amostras líquidas límpidas, sem sólidos em suspensão, que possam ser
filtradas através de uma membrana de poro 0,45μm. Sua principal vantagem é que
permite a inoculação de maiores volumes da amostra, concentrando na membrana os
micro-organismos presentes na quantidade inoculada. O limite de detecção é de 1
UFC por volume inoculado, sendo indicado para amostras com contagens abaixo do
limite de detecção de outros procedimentos. Porém, a área de exposição para o desenvolvimento
bacteriano é pequena, sendo necessária, em muitos casos, a diluição do material
para que as Unidades Formadoras de Colônia (UFC) consigam ser quantificadas nos
casos em que houver uma contaminação elevada. A quantificação é feita pelo
método de contagem em placas, utilizando o m-Pac como meio de cultivo.
Formulação
e Preparo
Fórmula
Aproximada Por Litro
- L-lisina - 5,0 g
- Cloreto de sódio - 5,0 g
- Extrato de levedura - 2,0 g
- Xilose - 1,25 g
- Sacarose - 1,25 g
- Lactose - 1,25 g
- Vermelho de fenol - 0,08 g
- Citrato de amônio e ferro III - 0,8 g
- Sulfato de magnésio - 1,5 g
- Ágar - 12,0 g
- Tiossulfato de sódio - 5,0 g
- Canamicina - 8,0 mg
- Ácido nalidíxico - 37,0 mg
O pH final é 7.1 ± 0.2
O
extrato de leveduras, a lisina e os carboidratos proveem os micro-organismos de
nitrogênio, fonte de energia e vitaminas para o seu metabolismo. O cloreto de sódio
mantém o equilíbrio osmótico, os sais proveem de íons, o vermelho fenol é
utilizado como indicador que muda para amarelo com a produção de ácido
resultante da fermentação dos carboidratos, a canamicina inibe a síntese da
proteína em micro-organismos gram positivos, e o ácido nalidíxico bloqueia o crescimento
de gram negativos. Agar é o agente solidificante.
O preparo do meio deve seguir
as instruções do fabricante. Não autoclavar. Ferver o meio por um minuto. Use o
meio dentro de 1 semana após a preparação
Devido à presença de substratos
sensíveis, recomenda-se manter o produto protegido de incidência direta de luz
(natural ou artificial) e evitar grandes variações de temperatura até a
utilização.
Micro-organismos
Indicados para o Teste de Grow Promotion
Para verificar a esterilidade
dos meios de cultura, colocá-los em incubação por, no mínimo, 72 horas, na
temperatura adequada. Não deve haver crescimento microbiano ou alteração de cor.
As farmacopeias não citam o
ATCC de P. aeruginosa para esse meio em especifico. Neste caso
pode-se usar o que o certificado do fabricante sugere: Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 e ATCC 27853 para controle
positivo e Escherichia coli ATCC 25922 para controle negativo
Inocule
no meio pequeno número (não mais de 100 UFC) do micro-organismo teste. Incubar
na temperatura e tempo especificados no ensaio de pesquisa Pseudomonas em água.
As
colônias de 0,8-2,2 mm, de aparência plana, com bordas externas claras e
centros marrom-esverdeados a preto-esverdeados são indicativas de Pseudomonas aeruginosa.
Fontes:
Difco
& BBL Manual - Manual of Microbiological Culture Media – Second Edition
United
States Pharmacopeia 42ª ed. 2019
Farmacopeia
Brasileia 6ª ed. 2019
Hardy
Diagnostics – Site acessado em 20/02/2020
Certificado
Laborclin - LB 172177 - Rev 02 – 05/2018
