Meios Cromogênicos para Detecção de Coliformes Totais e Termotolerantes em Água

Indicação de uso

São meios de cultura contendo na sua formulação substratos enzimáticos específicos que possibilitam melhorias significativas na recuperação dos micro-organismos e na identificação dos mesmos, para análise em amostras de água potável, água bruta, água superficial, água subterrânea, água de reuso, água para uso farmacêutico, água purificada em geral, água engarrafada e efluentes, sem necessidade de reagentes adicionais para confirmação. A Farmacopeia Brasileira cita o uso e a Farmacopeia Americana cita como método o Standard Methods For The Examination Of Water And Wastewater, que por sua vez também cita o uso, mais precisamente do Colilert®, em que vou me basear para este artigo. Existem outras marcas, mas aqueles que forem auditados pelo INMETRO, recomenda-se o uso do Colilert®. Este pode ser usado para teste de ausência ou presença ou para teste quantitativo.

Princípio do Método

O teste Colilert® usa a exclusiva Tecnologia do Substrato Definido - Defined Substrate Technology (DST) para detectar simultaneamente coliformes totais e E. coli. Dois indicadores nutrientes, ONPG e MUG, são as principais fontes de carbono no Colilert e podem ser metabolizados pela enzima dos coliformes β-galactosidase, e pela enzima da E. coli β-glucuronidase, respectivamente.

À medida que os coliformes crescem no teste Colilert, eles usam β-galactosidase para metabolizar ONPG e mudam sua cor de incolor para amarelo. 

E. coli usa β-glucuronidase para metabolizar MUG e criar fluorescência. Tendo em conta que a maioria dos não coliformes não tem estas enzimas, eles são incapazes de crescer e interferir. Os poucos não coliformes que têm estas enzimas são seletivamente suprimidos pela matriz especificamente formulada do teste Colilert®. A presença da E. coli pode ser confirmada por fluorescência sob a luz UV, devido sua atuação sobre o substrato MUG.

Esta abordagem é diferente dos meios tradicionais, que proporcionam um ambiente rico em nutrientes que favorecem o crescimento de organismos classificados como alvo e não alvo. Quando os organismos não alvo crescem e imitam os organismos classificados como alvo, ocorrem falso positivos. O crescimento de organismos não alvo também pode suprimir os organismos alvo e originar falso negativos nos meios tradicionais. Para suprimir organismos não alvo, os meios tradicionais incluem frequentemente elevados níveis de sais, detergentes ou outros agentes seletivos que podem inadvertidamente suprimir os organismos alvo e originar falso negativos.

O sistema de reagente foi concebido para suprimir bactérias não coliformes positivas para ONPG ou MUG por pelo menos 28 horas. Se a incubação ultrapassar as 28 horas, é possível que essas bactérias ultrapassem o sistema de supressão do teste Colilert® e reajam com ONPG ou MUG. Quando a incubação excede as 28 horas, apenas são válidos os resultados negativos. Os resultados positivos devem ser confirmados usando métodos tradicionais.

Leitura de Resultados

·         Incolor = negativo

·         Amarelo = coliformes totais

·         Amarelo/fluorescente = E. coli

No link abaixo pode-se acessar um vídeo explicando o uso:

https://www.google.com.br/search?q=Colilert+Manual+pdf&sca_esv=87faeafcc4202842&sxsrf=ADLYWILzgzdotimY5wNQTyrL_Xc4K7e1qA:1723505101697&ei=zZm6ZqCcKq7Y1sQP1ZTlgQE&start=10&sa=N&sstk=AagrsuizwaI2c2mE_nPr3vzHWWvEmoCKfa3M6D12i6EpmPs0bYpirSIICpIanxG5-DCuZvtw0fShWlhXz2vIS5HeVJM8lbPgWM1hkA&ved=2ahUKEwjgtuvqzPCHAxUurJUCHVVKORAQ8tMDegQIPhAE&biw=1360&bih=599&dpr=1#fpstate=ive&vld=cid:2b127b64,vid:Qwf3zf8RPLI,st:0

Fontes:

United States Pharmacopeia 43ª ed. 2020

Farmacopeia Brasileia 6ª ed. 2024

Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater 23ª ed.

https://www.idexx.com.br/pt-br/water/water-products-services/colilert/ acessado em 12/08/2024