Hoje vou dar uma leve
introdução ao assunto, que tem se tornado uma tendência cada vez mais atual.
São micro-organismos isolados em ambiente fabril, também conhecidos como micro-organismos “in house” ou “selvagens”;
É sempre importante
identificar suficientemente os isolados ambientais, de forma que se possa ter
um bom entendimento da microbiota observada no local. Isto irá possibilitar ao
microbiologista detectar alterações no ambiente, sugerindo preocupação no processo
de fabricação;
Essa identificação da
microbiota em ambiente fabril permite detectar a presença de micro-organismos
indesejáveis.
Investigação de Fontes
Pessoas – principal fonte de contaminação: Células humanas liberam constantemente partículas que carregam micro-organismos;
Matérias primas – fármacos, excipientes e material
auxiliar para fabricação, água;
Equipamentos – tanques, linhas de transferência,
bombas, misturadores e outros;
Ambientes – condições de estocagem, sistema de ar,
materiais de embalagem, estrutura física do ambiente fabril.
Qual o Impacto no Processo de Fabricação
Afeta a estabilidade do produto;
Afeta testes analíticos;
Afeta o ingrediente ativo;
Produz odores, sabores,
alteração de cor, textura ou metabólitos indesejáveis;
Potencial de crescer e
exceder as especificações de monitoramento ambiental;
Formação de biofilme em
sistemas de água;
Micro-organismos
indesejáveis podem causar infecções. Não apenas patógenos óbvios, isolados
ambientais representam risco.
Uso dos Isolados Ambientais
Validação de desinfetante: USP <1072>, <1116>;
Teste
de Promoção do Crescimento: USP <61>, <62>, <71>, ISO 11133;
Validação
de métodos de recuperação microbiana: USP <1227>;
Teste
de adequação: USP <61>, <62>, <71>, FB 5.5.3.1.4;
Teste
de eficácia antimicrobiana (Challenge Test): USP <51>, CTFA (atual PCPC);
Água para Fins
Farmacêuticos: USP <1231>, FB 8.5 (Biofilmes);
Ambientes
de processamento asséptico: USP <1116>, FB 8.1 (Media Fill e
Monitoramento Ambiental);
Investigação de Resultados Fora de Especificação: Guia nº 8 ANVISA versão 2.
Esse
Isolado é um MO Indesejável?
O laboratório deve
determinar se o organismo é indesejável:
Produtos estéreis vs. não estéreis;
Uso pretendido;
Público pretendido;
Via de administração prevista.
Como isolar um micro-organismo in-house
Através de monitoramento ambiental e testes microbiológicos, como a contagem, por exemplo
Programa
de Monitoramento Ambiental
Tenha um programa robusto
de monitoramento ambiental:
Avaliação de risco;
Planos de amostragem
qualificados para locais específicos;
Definir limites de
controle apropriados;
Use <1116> (USP),
capítulo 8.1 (FB) como orientação em salas limpas.
Teste de sistema de água;
Teste de matérias-primas;
Determinar a microbiota
local;
Identificar organismos
suspeitos.
Importância do Monitoramento Ambiental
Fornece dados importantes a serem considerados em um processo de investigação de resultados fora de especificação;
Esses dados devem ser
registrados, tabulados e compartilhados com todas as áreas envolvidas no
processo, de modo a otimizar a investigação e tomada de ação corretiva;
Falhas no programa de
monitoramento ocasionam liberação de produtos não-conformes, que por sua vez
pode gerar um recall
Isolamento, Identificação e Manutenção
O isolamento é feito a partir de colônias encontradas em análises de rotina e monitoramento ambiental;
A identificação de
micro-organismos é tradicionalmente baseada na morfologia de sua colônia,
morfologia celular, coloração diferencial, requisitos para crescimento e perfil
de utilização de carbono;
Uma vez identificado, o
isolado precisa ser mantido sob as mesmas condições das cepas de referência,
para uso na rotina do laboratório.
Cuidados Gerais à Serem Tomados
Isolar o micro-organismo em condições assépticas;
Utilizar métodos
confiáveis para identificação correta;
Os micro-organismos devem
ser mantidos em meios não seletivos;
Indica-se a armazenagem de
bactérias aeróbias em temperaturas entre 2-8ºC e bolores e leveduras devem ser
armazenados em temperatura ambiente;
Os repiques ou passagens
significam que os micro-organismos estão sendo transferidos de um meio para
outro;
Micro-organismos usados em
teste baseado na farmacopeia, não devem ter mais do que 5 passagens a partir da
cultura de referência;
Indica-se o armazenamento
de cepas que requerem CO2, à temperatura ambiente em jarras de anaerobiose
com gerador.
Problemas com Isolados Ambientais
Uma vez que um isolado ambiental é cultivado, ele perde sua característica "selvagem“;
Manter o organismo dentro
de 5 passagens;
Preparação da suspensão,
se for necessária uma concentração específica;
Pode perder a concentração
desejada - você não saberá até a conclusão do teste;
Pode ser necessário
refrigerar a suspensão por vários dias;
Podem ocorrer mutações.
Existem empresas que prestam serviços de identificação, liofilização, preservação e quantificação dessas cepas, como cepas de referência, é uma alternativa segura de garantir a qualidade da mesma, além de manter a rastreabilidade.
