Enterobacteria Enrichment Broth Mossel

Indicação de uso

O meio EE Broth Mossel Enrichment, também conhecido como Caldo de Enriquecimento de Enterobactérias segundo Mossel é utilizado para o cultivo e enriquecimento de Enterobacteriaceae em alimentos em ambiente de laboratório. O caldo EE Mossel não se destina ao uso no diagnóstico de doenças ou outras condições em seres humanos. O caldo EE Mossel está de acordo com os Requisitos Harmonizados da USP / EP / JP para pesquisa de bactérias gram-negativas bile tolerantes em produtos farmacêuticos não estéreis.

O caldo de EE Mossel Enrichment é preparado de acordo com a fórmula Mossel, Visser e Cornelissen. A fórmula contém dextrose para facilitar o crescimento da maioria das Enterobacteriaceae, assegurar a detecção de Salmonella e outros organismos negativos para lactose. O caldo de EE Mossel Enrichment deve ser usado como caldo de enriquecimento, seguido de um meio seletivo; por exemplo, Violet Ágar Biliar Vermelho.

A enumeração de Enterobacteriaceae é de grande preocupação em monitorar a condição sanitária dos alimentos. Enterobacteriaceae podem ser injuriadas em procedimentos de processamento de alimentos, que incluem exposição a baixas temperaturas, calor sub-marginal, secagem, radiação, conservantes ou desinfetantes. A recuperação depende de uma ressuscitação adequada de células danificadas. O EE Caldo Enriquecimento Mossel é usado para detectar e enumerar Enterobacteriaceae encontrados por mililitro ou por grama de amostra de teste de alimentos ao pela Técnica de Número Provável (MPN) com pré-enriquecimento. Em amostras de produtos farmacêuticos, é usado como meio de pré-enriquecimento para detecção de Bactérias Gram Negativas Bile Tolerantes.

Formulação e Preparo

Fórmula Aproximada Por Litro 

• Hidrolisado de pancreático de gelatina - 10,0 g
• Dextrose - 5,0 g
• Bile de boi desidratada - 20,0 g
• Fosfato de potássico monobásico- 2,0 g
• Fosfato dissódico didratado - 8,0 g
• Verde brilhante - 15,0 mg 

O hidrolisado de pancreático de gelatina é uma fonte complexa de nitrogênio. A dextrose favorece o crescimento de todas as Enterobacteriaceae positivas e negativas à lactose. A bile bovina inibe bactérias gram-positivas enquanto as bactérias gram-negativas indesejadas são inibidas pelo verde brilhante. O forte tamponamento do meio de cultura pelos sais fostato impede que o ácido formado mate a cultura.

O pH final é 7.2 ± 0.2

O preparo do meio deve seguir as instruções do fabricante. Aqueça a 100°C em banho-maria ou vapor fluído durante 30 minutos e esfriar imediatamente. Este meio não deve ser autoclavado devido à presença de corante e bile.

Micro-organismos Indicados para o Teste de Grow Promotion

Para verificar a esterilidade dos meios de cultura, colocá-los em incubação por, no mínimo, 72 horas, na temperatura adequada. Não deve haver turvação ou alteração de cor.

Os microrganismos citados pela United States Pharmacopeia e Farmacopeia Brasileira para o teste de Grow Promotion em EE Broth Mossel Enrichment são:

Para promoção de crescimento (verificar a seletividade):

Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027;

Escherichia coli ATCC 8739.

Para verificar a capacidade inibitória:

Staphylococcus aureus ATCC 6538.

Outros micro-organismos podem ser inoculados, de acordo com a metodologia usada.  

Inocule no meio pequeno número (não mais de 100 UFC) do micro-organismo. Incubar na temperatura especificada por não mais do que o menor período de tempo especificado no ensaio de pesquisa de bactérias gram negativas bile tolerantes. A produção de ácido faz com que a cor do meio EE Mossel fique amarela em uma reação positiva. Uma reação negativa resulta em nenhuma mudança de cor e o meio permanece verde.

Fontes:

Difco & BBL Manual - Manual of Microbiological Culture Media – Second Edition

United States Pharmacopeia 40ª ed. 2017

Farmacopeia Brasileia 5ª ed. 2010