Sabouraud Dextrose Agar (SDA)

Indicação de uso

O meio SDA – Sabouraud Dextrose Agar é usado para o isolamento, cultivo e manutenção de espécies não patogênicas e patogênicas de bolores e leveduras. O SDA foi formulado por Raymond Sabouraud em 1892 para cultura de dermatófitos. O pH é ajustado para aproximadamente 5,6 para aumentar o crescimento de fungos, especialmente dermatófitos, e inibir ligeiramente o crescimento bacteriano em amostras clínicas. É o meio descrito em métodos farmacopeicos para enumeração de fungos em amostras de fármacos, cosméticos, alimentos etc. Em monitoramento ambiental, é usado para a detecção e enumeração de fungos em superfícies, manipuladores e ambientes controlados. Também é um meio indicado para a manutenção de cepas de bolores e leveduras para rotina laboratorial.

Formulação e Preparo

Fórmula Aproximada Por Litro

• Dextrose – 40 g
• Digestão Péptica de Tecido Animal - 5 g
• Digestão pancreática de caseína- 5 g
• Agar – 15 g

Peptonas fornecem nitrogênio e vitaminas necessárias para o crescimento do organismo no Ágar Sabouraud Dextrose. A alta concentração de dextrose serve como fonte de energia. O ágar é o agente solidificante.

O pH final é 5.6 ± 0.2. Alguns fungos podem ser inibidos pelo pH ácido do meio.

O preparo do meio deve seguir as instruções do fabricante. Quanto ao tempo de esterilização, este deve estar de acordo com a qualificação do equipamento.

É importante evitar o superaquecimento do meio com um pH ácido, pois pode degradar o meio.

Alguns suplementos podem ser adicionados ao preparo do meio para inibir o crescimento de micro-organismos indesejados. Temos como exemplos de suplementos a gentamicina (um antibiótico aminoglicosídeo que inibe a crescimento de bactérias gram-negativas), cloranfenicol, que inibe a uma ampla gama de bactérias gram-negativas e gram-positivas, e cicloheximida que é um agente antifúngico que principalmente ativo contra fungos saprófitas e não inibe leveduras ou dermatófitos.

Também podem ser adicionados lecitina de soja para neutralizar compostos de amônio quaternário, e polissorbato 80 para neutralizar desinfetantes fenólicos. Essa neutralização é importante para monitoramento ambiental.

Micro-organismos Indicados para o Teste de Grow Promotion

Os compêndios trazem uma lista com os microrganismos a serem inoculados para o teste de grow promotion (também conhecido como teste de promoção de crescimento ou capacidade nutritiva dos meios de cultura). Outros micro-organismos, como cepas in house podem ser inoculados também de modo a comprovar a capacidade do meio de recuperar os mesmos. Inocular menos que 100 UFC do micro-organismo teste ao meio. Incubar à temperatura adequada e observar o crescimento visível comparando com um controle (branco) do mesmo meio de cultura.

Para verificar a esterilidade dos meios de cultura, colocá-los em incubação por, no mínimo, 72 horas, na temperatura adequada. Não deve haver crescimento de micro-organismos.

Os micro-organismos citados pela United States Pharmacopeia e Farmacopeia Brasileira para o teste de Grow Promotion em SDA são:

Candida albicans ATCC 10231;

Aspergillus brasiliensis ATCC 16404.

Após inoculação, as condições de incubação são temperatura de 20º a 25ºC por 2-5 dias.

Fontes:

Difco & BBL Manual - Manual of Microbiological Culture Media – Second Edition

United States Pharmacopeia 40ª ed. 2017

Farmacopeia Brasileia 5ª ed. 2010