Tryptic Soy Agar (TSA)

Indicação de uso

O meio TSA – Tryptic Soy Agar, também conhecido como Soybean-Casein Digest Agar, Agar Caseína Soja ou Ágar Digestão Enzimática de Caseína-Soja é o meio de escolha dos métodos farmacopeicos para o ensaio de Contagem do número total de micro-organismos Mesofílicos (também chamado de Bioburden em alguns laboratórios) em diversos seguimentos, como industria farmacêutica, cosmética, alimentos etc. Também é utilizado para monitoramento ambiental, e embora seja mais indicado para o crescimento de bactérias, tem sido muito usado para detecção de fungos em ambientes controlados, bastando incubar em temperatura ideal para o crescimento de bolores e leveduras. Pode ser utilizado como meio de manutenção de cepas bacterianas e para isolamento de bactérias, para uma identificação posterior.

TSA é usado para o isolamento e cultivo de micro-organismos não fastidiosos e fastidiosos, mas não é o meio de escolha para anaeróbios.

Formulação e Preparo

Fórmula Aproximada Por Litro

• Peptona de caseína pancreática – 15 g
• Farinha de soja obtida por digestão papaínica - 5 g
• Cloreto de Sódio - 5 g
• Agar - 15 g

A combinação de caseína e peptonas de soja em TSA torna o meio altamente nutritivo, fornecendo nitrogênio orgânico, particularmente aminoácidos e peptídios de cadeia mais longa. O cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico. Agar é o agente solidificante.

O pH final é 7.3 ± 0.2

O preparo do meio deve seguir as instruções do fabricante. Quanto ao tempo de esterilização, este deve estar de acordo com a qualificação do equipamento.

No preparo em laboratório, outros constituintes podem ser acrescentados à preparação deste meio, de modo à adequá-lo para seus diversos usos. Para análises clinicas, é usado sangue de ovelha a 5%. Placas para monitoramento ambiental podem vir acrescidas de inativantes para os princípios ativos do saneantes mais usados para limpeza e sanitização dos ambientes de laboratório e planta de fábrica. Para análises em produtos acabados, recomenda-se a adição de agentes neutralizantes adequados ao tipo de conservante.

Micro-organismos Indicados para o Teste de Grow Promotion

Os compêndios trazem uma lista com os micro-organismos a serem inoculados para o teste de grow promotion (também conhecido como teste de promoção de crescimento ou capacidade nutritiva dos meios de cultura). Outros micro-organismos, como cepas in house podem ser inoculadas também de modo a comprovar a capacidade do meio de recuperar os mesmos. Uma suspensão com não mais do que 100 UFC deve ser inoculada no meio. Para ser considerado aprovado, a Farmacopeia Americana recomenda que o crescimento obtido não deve diferir por um fator maior que 2 do valor calculado para um inóculo. Já a Farmacopeia Brasileira diz que o crescimento obtido que não deve ser inferior a 50% em relação ao inóculo padronizado. Para verificar a esterilidade dos meios de cultura, colocá-los em incubação por, no mínimo, 72 horas, na temperatura adequada. Não deve haver crescimento de micro-organismos.

Os micro-organismos citados pela United States Pharmacopeia e Farmacopeia Brasileira para o teste de Grow Promotion em TSA são: 

• Staphylococcus aureus ATCC 6538;
• Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027;
• Bacillus subtilis ATCC 6633;
• Candida albicans ATCC 10231;
• Aspergillus brasiliensis ATCC 16404. 

Após inoculação, as condições de incubação para bactérias são temperatura de 30 à 35ºC por 18-24 horas, para Candida albicans 20º a 25ºC por 2-3 dias e para Aspergillus brasiliensis 20º a 25ºC por 5-7 dias ou até esporulação evidente.

Alguma dúvida? Deixem seus comentários. Até o próximo post!

Fontes:

Difco & BBL Manual - Manual of Microbiological Culture Media – Second Edition

United States Pharmacopeia 40ª ed. 2017

Farmacopeia Brasileia 5ª ed. 2010