Tryptic Soy Broth (TSB)

Indicação de uso

O meio TSB – Tryptic Soy Broth, também conhecido como Soybean-Casein Digest Broth, Caldo Caseína Soja ou Caldo Digestão Enzimática de Caseína-Soja é o meio de escolha dos métodos farmacopeicos para diversos ensaios, tais como Teste de Esterilidade, Contagem de Microrganismos Mesofílicos (também chamado de Bioburden em alguns laboratórios), pesquisa de patógenos em diversos seguimentos, como indústria farmacêutica, cosmética, alimentos etc. Pode ser usado como meio enriquecedor para recuperação de micro-organismos para isolamento e identificação.

Em testes de Media Fill, é o meio de escolha para substituir o produto, de modo a simular operações assépticas para assegurar que os processos utilizados são capazes de produzir produtos estéreis.  

O TSB foi escolhido pela USDA Animal and Plant Health Inspection Service para detecção de bactérias viáveis em vacinas vivas.

Devido à sua capacidade de promoção de crescimento, o TSB também é recomendado para uso como caldo de inóculo para difusão de disco e ágar teste de sensibilidade antimicrobiana por diluição, conforme Instituto de Normas Clínicas e Laboratoriais (CLSI).

TSB é um meio nutritivo que permite o crescimento de uma ampla variedade de micro-organismos, incluindo bactérias aeróbicas, facultativas e anaeróbicas comuns e fungos.

Formulação e Preparo

Fórmula Aproximada Por Litro 

• Peptona de caseína pancreática – 17 g
• Farinha de soja obtida por digestão papaínica - 3 g
• Cloreto de Sódio - 5 g
• Fosfato de Potássio Dibásico – 2,5 g
• Dextrose – 2,5 g 

Digestões enzimáticas de caseína e soja fornecem aminoácidos e outras substâncias nitrogenadas complexas. Dextrose é uma fonte de energia. Cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico. O fosfato de potássio dibásico age como um tampão para controlar o pH.

O pH final é 7.3 ± 0.2

O preparo do meio deve seguir as instruções do fabricante. Quanto ao tempo de esterilização, este deve estar de acordo com a qualificação do equipamento.

Algumas modificações na formulação permitem diversificar o uso deste meio tão versátil. A adição de 6,5% de cloreto de sódio ao TSB permite a diferenciação de enterococos tolerantes ao sal, que são resistentes ao alto teor de sal, da intolerância ao sal do grupo S. bovis e outras espécies de estreptococos. Nesta concentração, o cloreto de sódio é um agente seletivo que interfere com permeabilidade de membrana osmótica e equilíbrio eletrocinético. Fildes Enrichment é uma digestão péptica de sangue de ovelha que fornece o X (heminina) e V (dinucleotídeo de nicotinamida adenina, NAD) fatores necessários para o crescimento de H. influenzae. A dextrose é omitida da fórmula do TSB para permitir o uso do meio em estudos de fermentação. A concentração de carboidratos usada com mais frequência nas reações de fermentação é de 0,5% ou 1%.

Micro-organismos Indicados para o Teste de Grow Promotion

Os compêndios trazem uma lista com os microrganismos a serem inoculados para o teste de grow promotion (também conhecido como teste de promoção de crescimento ou capacidade nutritiva dos meios de cultura). Outros micro-organismos, como cepas in house podem ser inoculados também de modo a comprovar a capacidade do meio de recuperar os mesmos. Inocular menos que 100 UFC do micro-organismo teste ao meio. Incubar à temperatura adequada e observar o crescimento visível comparando com um controle (branco) do mesmo meio de cultura.

Para verificar a esterilidade dos meios de cultura, colocá-los em incubação por, no mínimo, 72 horas, na temperatura adequada. Não deve haver crescimento de micro-organismos.

Os microrganismos citados pela United States Pharmacopeia e Farmacopeia Brasileira para o teste de Grow Promotion em TSB são: 

• Staphylococcus aureus ATCC 6538;
• Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027;
• Bacillus subtilis ATCC 6633;
• Candida albicans ATCC 10231;
• Aspergillus brasiliensis ATCC 16404.

Após inoculação, as condições de incubação para bactérias são temperatura de 30 à 35ºC por 18-24 horas, para fungos, a temperatura é de 20º a 25ºC por 2-5 dias. As cepas de B. subtilis, C. albicans e A. brasiliensis são usadas para avaliar o TSB preparado para o ensaio de esterilidade.

Fontes:

Difco & BBL Manual - Manual of Microbiological Culture Media – Second Edition

United States Pharmacopeia 40ª ed. 2017

Farmacopeia Brasileia 5ª ed. 2010