ÁGAR BURKHOLDERIA CEPACIA SELETIVO - BCSA

Indicação de uso

O Ágar Burkholderia cepacia Seletivo – BCSA é um meio seletivo utilizado para o crescimento qualitativo do complexo Burkholderia cepacia em amostras diversas. As espécies do complexo BCC são isoladas frequentes no ambiente, água, solo, plantas e nos seres humanos podem colonizar o trato respiratório.

O F.D.A. alertou sobre a necessidade de se testar a presença deste micro-organismo no ambiente, na água e nas matérias primas e produtos acabados devido a uma série de recalls envolvendo complexo Burkholderia cepacia.

A Farmacopeia Americana (USP) publicou no segundo suplemento da USP 42 NF 37 de 2019, por enquanto somente ela solicita o teste. Mas acredito que em breve outras farmacopeias irão solicitar esse teste. No capitulo de requisitos gerais para testes microbiológicos em produtos não estéreis, a descrição do meio BCSA para pesquisa do complexo B. cepacia (BCC). É o capítulo <60> MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF NONSTERILE PRODUCTS — TESTS FOR BURKHOLDERIA CEPACIA COMPLEX. Especialmente as categorias de produtos a serem testados são aquelas para uso por inalação ou preparações aquosas de uso oral, mucosa oral, cutânea ou nasal.

O crescimento de espécie B. cepacia, que pode vir a passar despercebido em meios convencionais como ágar sangue e MacConkey, devido ao crescimento lento de B. cepacia frente a outras bactérias como K. pneumoniae mucoides, P. aeruginosa e espécie Staphylococcus, o que pode acarretar em um resultado falso negativo.

Esta é uma bactéria que ao longo do tempo vem ganhando uma crescente atenção, a principio sendo encontrada em sistemas de agua e assim como a Pseudomonas, PODE criar biofilme.

Burkholderia cepacia previamente era denominada Pseudomonas cepacia. Em 1992 Bcc foi transferida do gênero Pseudomonas para o gênero Burkholderia. O gênero Burkholderia contém mais de 60 espécies. Mais tarde com a realização de 16 rRNA resultou a divisão de B. cepacia em espécies intimamente relacionadas, denominadas complexo B. cepacia. Bcc consiste em espécies intimamente relacionadas com ßprotobactéria

É uma bactéria Gram Negativa. Possui 20 diferentes espécies, mas fenotipicamente similares. As espécies do complexo Bcc são isoladas frequentemente no ambiente, água, solo, plantas e nos seres humanos, podem colonizar o trato respiratório. Patógeno oportunista causando infecções respiratórias crônicas em pacientes imunossuprimidos como pacientes com fibrose cística e hemoglobinopatias das células falciformes. São frequentemente resistentes aos antibióticos conhecidos

Formulação e Preparo

Fórmula Aproximada Por Litro 

• Peptona Caseína - 10,0g
• Lactose - 10,0g
• Sacarose - 10,0g
• Cloreto de Sódio - 5,0g
• Extrato de Levedura - 1,5g
• Vermelho de Fenol - 0,08g
• Gentamicina - 10,0g
• Vancomicina - 2,5g
• Cristal Violeta - 2,0g
• Polimixina - B 6,000U
• Ágar - 14,0g

 O pH final é 6.8 ± 0.3

Os agentes seletivos cristal violeta, a polimixina B, gentamicina e a vancomicina, inibem organismos comumente encontrados nas secreções respiratórias que não sejam o Bcc. Sacarose e lactose são carboidratos para enriquecimento e diferenciação com vermelho de fenol como indicador de pH.

OBS.: Embora esse meio já exista, atualmente somente a Plastlabor fornece a formulação de acordo com o capitulo 60 da USP. Isso é importante ser verificado para qualquer meio farmacopeico, A Plastlabor já fornece em placas prontas. Acredito que posteriormente outros fabricantes vão se adequar.

O meio deverá ser armazenado em ambiente com temperatura controlada entre 2 - 15°C ao abrigo da luz.

Cabe ressaltar que, a faixa de temperatura escolhida para o seu armazenamento deverá ser seguida até o término do seu prazo de validade, a fim de evitar a formação de água de condensação no produto.

Micro-organismos Indicados para o Teste de Grow Promotion

Para verificar a esterilidade dos meios de cultura, colocá-los em incubação por, no mínimo, 72 horas, na temperatura adequada. Não deve haver crescimento microbiano ou alteração de cor.

Os micro-organismos citados pela United States Pharmacopeia para o teste de Grow Promotion em BCSA são:

Para promoção de crescimento (verificar a seletividade):

B. cepacia ATCC 25416, B. cenocepacia ATCC BAA 245 e B. multivorans ATCC BAA 247

Para verificar capacidade inibitória:

Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, NCIMB 8626, CIP 82.118, ou NBRC 13275 e Staphylococcus aureus ATCC 6538, NCIMB 9518, CIP 4.83, ou NBRC 13276

Outros micro-organismos podem ser inoculados, de acordo com a metodologia usada.  

Inocule no meio pequeno número (não mais de 100 UFC) do micro-organismo teste. Incubar na temperatura e tempo especificados no ensaio de pesquisa B. cepacia.

Realizar GP em cada novo lote de meio de cultura adquirido pronto para uso ou preparado no laboratório, em paralelo com um meio de cultura previamente aprovado.

Os micro-organismos devem ser rastreáveis de uma Cultura de Coleção de Referência e devem estar em não mais do que 5 passagens da Cultura de Referência. Compare o crescimento no novo meio de cultura com o crescimento no meio previamente aprovado. O crescimento deve ser "comparável“. Não existe na USP a definição de quantidade do que é “comparável” Em paralelo realizar o controle do inóculo em ágar não seletivo: deve haver ≤ 100 UFC. E se não houver lote previamente aprovado? Considere adicionar outros Analistas do Laboratório. Use um número significativo de replicatas. A média das médias pode ser considerada como ponto de referência. Essas recomendações servem para a promoção de crescimento de qualquer meio.

A possível presença de Bcc é indicada pelo crescimento de colônias marrom-esverdeadas com halos amarelos, ou colônias brancas cercadas por uma zona vermelho-rosa no BCSA. Qualquer crescimento no BCSA é confirmado por testes de identificação.

Fontes:

United States Pharmacopeia 42ª ed. 2019

Certificado Plastlabor

Apresentação: Complexo Burkholderia cepacia (Bcc) - USP <60> - Apresentado pela Plastlabor